پاورپوینت استفاده از مهار کننده های MITOTIC جهت افزایش سطح پلوئیدی در اسفناج ( 17 اسلاید )

کاملاً به زبان فارسی

شامل 17 اسلاید

بعضی از مباحثی که در این پاورپوینت به آن پرداخته شده است:

معرفی اسفناج

مواد و روش های اصلاح نژاد اسفناج

شمارش کروموزوم

تحلیل فلوسایتومتری

آنالیز آماری

نمودار و اعداد

نتایج و بحث

ارزیابی سطح پلوئیدی از طریق فلوسایتومتری

نتیجه گیری

و موارد دیگر

بخشی از مطالب این پاورپوینت در زیر آورده شده است:

اسفناج (Spinacia oleracea L.)   یک سبزی برگدار یکساله فصل خنک است.

یکی از عوامل مهم در پرورش و تولید اسفناج افزایش اندازه برگ است.

این سبزی برگ سبز مهم در آب و هوای معتدل است.

ارزش غذایی بالایی دارد و منبع خوبی از مواد معدنی و ویتامین ها است.

اسفناج یک گونه دیپلوئیدی است و تعداد کروموزوم آن n=12  2 است

هدف اصلی برنامه‌های اصلاح نژاد اسفناج، توسعه واریته‌هایی با ویژگی‌هایی از جمله:

-          افزایش مقاومت به بیماری

-           تحمل به تنش غیرزیستی

-          بهبود عملکرد

-          کیفیت مانند کاهش سطوح نیترات و اگزالات

-          افزایش سطح فولات در برگ‌های اسفناج

دستکاری پلوئیدی به عنوان یک ابزار ارزشمند در بهبود ژنتیکی چندین گونه گیاهی در نظر گرفته شده است

برتری پلی پلوئیدها هدف بسیاری از پرورش دهندگان گیاهی در قرن گذشته بوده است، که پلی پلوئیدی را به طرق مختلف برای به دست آوردن ارقام گیاهی بهبود یافته بکار برده اند.

گیاهان پلی پلوئید ممکن است کاربردهای متنوعی از جمله غلبه بر موانع هیبریداسیون، بهبود تحمل به تنش و مقاومت در برابر آفات و علاوه بر آن توانایی بازگرداندن باروری در هیبریدهای وسیع داشته باشند.

آنها همچنین برگهای بزرگتر و ضخیم تری داشتند . در سال های اخیر از تکنیک پلی پلوئیدی در گیاهان دارویی به منظور به دست آوردن گیاهان بزرگتر با متابولیت های ثانویه بالاتر استفاده می شود.

مطالعات متعددی در مورد ارتباط سطح پلوئیدی با خصوصیات مورفولوژیکی و فیتوشیمیایی اسفناج انجام شده است.

آزمایشی را بر روی پرورش اسفناج پلی پلوئیدی برای افزایش اندازه برگها و ماده خشک به عنوان یک ارزش اقتصادی مهم انجام داد.

شروع گلدهی به طور قابل توجهی در پلی پلوئیدها به تعویق افتاده است.

همچنین، تریپلوئیدها و تتراپلوئیدها نسبت بیشتری از گیاهان تک پایه و نسبت نر کمتری نسبت به دیپلوئیدها داشتند.

فلوسیتومتری، روشی سریع و دقیق برای تخمین محتوای DNA، به روش غالب برای تعیین اندازه ژنوم گیاه تبدیل شده است در ابتدا، یک رنگ فلورسنت که به DNA  متصل می شود به سوسپانسیون سلول ها یا هسته های منفرد نفوذپذیر اضافه می شود.

هدف از این مطالعه بررسی اثرات کلشی سین، تری فلورالین و اوریزالین بر افزایش سطح پلوئیدی اسفناج بود.

مواد و روشها

بذرهای  اسفناج (S. oleraceae cv. Oriental Pride) از ( شرکت بذرکاران غربی) با خلوص 99 درصد استفاده شد.

20 بذر برای هر تیمار در 3 تکرار با قارچ کش تیرام ضد عفونی و در پتری دیش قرار داده و در آب مقطر خیسانده و روی شیکر چرخشی با سرعت 110 دور در دقیقه قرار دادند. پس از 2 ساعت، بذرها روی کاغذ صافی در دمای اتاق به مدت 10 دقیقه خشک شدند و در محلول کلشی سین، تری فلورالین و اوریزالین (جدول 1) در تاریکی در دمای اتاق غوطه ور شدند تا پلی پلوئیدی ایجاد شود.

شمارش کروموزوم

شناسایی پلوئیدی با شمارش کروموزوم نوک ریشه انجام شد.

15  نوک ریشه به طول 1.0-1.5 سانتی متر از هر سه تکرار جمع آوری شد و مراحل شمارش کروموزوم مطابق جدول 2 انجام شد. پس از رنگ آمیزی، نوک ریشه ها بریده شده و در قطره اسید استیک 45 درصد خیس شده و سپس روی لام ها له شدند. در نهایت از طریق میکروسکوپ نوری با بزرگنمایی 40 برابر مشاهده شدند.

تحلیل فلوسایتومتری

سطوح پلوئیدی نهال های اسفناج تیمار شده با غلظت های مختلف کلشی سین، تری فلورالین و اوریزالین و زمان های مختلف مواجهه از طریق فلوسایتومتری تعیین شد. جداسازی و رنگ‌آمیزی هسته‌ها طبق پروتکل‌های ارائه‌شده توسط Partec (Partec GmbH، Münster، آلمان) انجام شد و جعفری به عنوان گیاه استاندارد استفاده شد. حدود 1 تا 1.5 سانتی متر نوک ریشه با تیغ دو طرفه در پتری دیش حاوی 500 میکرولیتر بافر استخراج CyStain UV Precise P, Partec) خرد شد. پس از 2 تا 3 دقیقه، نمونه ها از طریق الک نایلونی با اندازه منافذ 50 میکرومتر فیلتر شدند. هسته ها با بافر رنگ آمیزی DAPI (CyStain UV Precise P Staining Buffer، Partec) رنگ آمیزی شدند و به مدت 1 تا 2 دقیقه در دمای 25 درجه سانتی گراد انکوبه شدند. سپس محلول فیلتر شده در لوله فلوسایتومتری ریخته شد تا میانگین فلورسانس نسبی DNA تعیین شود. هر نمونه 3-4 بار آنالیز شد و هیستوگرام DNA به دست آمد.

پیک استاندارد طوری برنامه ریزی شده بود که در کانال 50 با شدت نسبی فلورسنت ظاهر شود.

آنالیز آماری

آزمایش به صورت فاکتوریل در قالب طرح کاملا تصادفی انجام شد. تجزیه و تحلیل های آماری با نرم افزار SPSS 16.0 انجام شد. میانگین ها با استفاده از آزمون چند دامنه ای دانکن در 05/0  P< مقایسه شدند.

بر روی دکمه زیر کلیک کنید و این پاورپوینت را بصورت آنلاین پرداخت و دانلود کنید.